多聚甲醛组织固定了半年一般不再有效。
多聚甲醛作为一种常用的组织固定剂,其工作原理是通过抑制蛋白质合成来冻结”细胞结构,使其保持形态稳定。然而,多聚甲醛固定组织的效果是有时间限制的。通常情况下,使用4%的多聚甲醛固定标本的时间不应超过48小时。这是因为固定时间过长会导致组织变得脆弱,甚至可能影响抗原的活性。在4°C以下的低温环境中,虽然可以延长保存时间至一个月左右,但抗原的活性仍然可能会显著降低。
固定时间过久会对组织产生多方面的不利影响。首先,长时间的多聚甲醛固定会损失组织中的抗原,使得组织中蛋白的抗原表位无法充分暴露,这在进行免疫组化等后续实验时可能导致假阴性结果。其次,多聚甲醛中的醛基可能与抗原蛋白的氨基发生交联反应,形成羧甲基,这种交联反应会改变抗原决定簇的三维构象,造成空间障碍,使得某些抗原决定簇无法被抗体识别。此外,多聚甲醛固定液中的成分也可能随时间发生变化,如醛基被氧化为酸,导致溶液pH值降低,这同样会影响后续的染色和实验结果。
因此,当多聚甲醛组织固定了半年之久时,其固定效果很可能已经大大降低甚至失效。此时的组织可能已经无法保持原有的结构和形态,抗原活性也显著降低,无法满足后续实验的需求。因此,在进行组织固定时,应严格控制固定时间,避免过长固定导致的组织损伤和抗原损失。对于已经固定较长时间的组织样本,如果需要进行后续实验,建议重新进行固定处理。