1. 多聚甲醛固定是实验室常见的步骤,主要用于保存样本、灭活微生物以及作为染色前的预处理。
2. 然而,多聚甲醛固定可能会影响抗体与细胞表面的结合,导致假阴性和假阳性结果。因此,了解哪些抗体不适合预固定至关重要。
3. Biolegend公司的技术员已经进行了相关测试,并在其网站上提供了人类和小鼠抗原的抗体预固定影响表格。
4. 大多数不能预固定的抗体是趋化因子受体。实验者在进行实验时应避免先固定后染色,以防止影响结果的准确性。
5. 对于染色后的固定,多聚甲醛主要影响的是荧光素,尤其是新型串联染料。因此,使用多聚甲醛固定后的样本需要在4小时内进行分析,或转移到不含多聚甲醛的缓冲液中以延长保存时间。
6. 多聚甲醛固定也可能影响GFP荧光,因为固定会改变GFP蛋白的构象,影响其产生荧光。
7. 针对多聚甲醛固定的影响,提出了几种解决方案:避免预固定易受影响的分子、使用1%多聚甲醛预固定、使用FlowGuard®细胞保存液或避光、4度保存染色后的样本。
8. 对于担心荧光稳定性的实验者,可以考虑购买适用于串联染料的专用保存剂。