酶联免疫吸附剂测定方法类型和操作步骤
酶联免疫吸附剂测定(ELISA)是一种广泛应用于抗原和抗体检测的技术,依据试剂和样本特性,有多种检测方法,包括双抗体夹心法、双位点一步法、间接法、竞争法和捕获法,以及亲和素和生物素的ELISA。
1. 双抗体夹心法:固相抗体与特异性抗体结合,标本中的抗原与固相抗体反应,酶标抗体接着与抗原复合物结合,显色产物代表抗原含量。
2. 双位点一步法:通过使用针对抗原不同部位的单克隆抗体,简化操作,提高敏感性和特异性。
3. 间接法测抗体:固相抗原结合受检血清中的抗体,酶标抗抗体标记抗体,颜色深浅反映抗体浓度。
4. 竞争法:受检抗原与酶标抗原竞争与固相抗体结合,颜色差异显示抗原量。
5. 捕获法测IgM:先捕获血清中的IgM,然后测定特异性IgM,排除干扰。
6. 亲和素和生物素ELISA:利用亲和素和生物素的高结合效率,放大检测信号,提高敏感性。