酶活性的测定通常采用两种主要方法：终点法和动力学方法。
终点法通过测定反应完成所需的时间来评估酶活力。例如，α-淀粉酶活力测定中，碘与淀粉反应产生蓝色，淀粉酶的加入会使其反应消失，呈现红棕色。颜色消失的时间越短，酶活力越高。碘对淀粉颜色反应的消失时间可反映酶的活性强度。
动力学方法则关注一定时间内化学反应的量。具体包括：
比色法：适用于产物与特定试剂反应产生稳定有色溶液的情况，如蛋白酶活力测定，通过酪氨酸与福林试剂反应生成蓝色化合物，颜色深浅与酪氨酸量成正比。
量气法：适用于产生气体的酶促反应，如氨基酸脱羧酶和脲酶活力测定，通过测量产生的二氧化碳量来评估酶活性。
滴定法：适用于产物为酸性物质的反应，如脂肪酶活力测定，通过脂肪酸增加量来衡量酶的活性。
分光光度法：利用底物和产物的光吸收特性，直接测量反应中底物减少或产物增加，广泛用于氧化还原酶活力测定，如NADH2和NADPH2的测定。
放射测量法：常用同位素标记底物，通过分离和测定放射性产物来判断反应速度，如脲酶活力测定中尿素的14C标记。
酶偶联分析：对于无法直接测定的酶，可利用工具酶进行连续反应，如己糖激酶活力测定，通过测定NADH或NADPH的吸收光谱变化间接测量。
值得注意的是，使用酶偶联分析时，工具酶必须纯度高且具有高度专一性，以避免干扰测定结果。
