慢病毒滴度测定的全攻略旨在提供实验中转移遗传物质的重要手段——慢病毒浓度（滴度）的测定方法。本文将介绍个人常用的两种测定方法，以便读者根据实验目的选择最合适的方案。
首先，我们需要考虑是否需要准确测定慢病毒的滴度。对于用于建立稳定过表达编码基因或shRNA等细胞系的实验，通常不需要准确滴度测定。这类情况下，即使感染效率没有达到100%，也能通过抗生素筛选或流式分选等方法，将阳性细胞挑出来，因此无需过分关注滴度的准确性。
对于新手或特定实验目的，推荐使用快速测定法，如Clontech的Lenti-X GoStix试纸。这种方法通过测定病毒p24外壳蛋白量来估算滴度，尽管不如ELISA法准确，但操作简便快捷，适合快速筛选。具体操作包括取20 µl 293T细胞培养上清滴到试纸上，滴加3-4滴Chase buffer，静置后显色。只要T处有条带显示，即证明慢病毒粗上清达到可用滴度。
若实验需求较高准确度，如进行RNAi-screening或CRISPR-screening等严格控制MOI的实验，则需采用准确测定法。其中，荧光报告基因法对于携带荧光报告基因的慢病毒较为简单，实验流程包括感染48~72小时后测定荧光基因表达。然而，抗生素筛选法则需要等待抗性基因充分表达，再加入抗生素筛选数天，确保彻底杀灭阴性细胞后进行细胞计数并换算滴度。该方法需考虑细胞培养时间的延长可能带来的变异度，以及高剂量病毒对细胞活性的影响。
为了减小变异度，优化实验方案如下：从第三天等分的两份细胞中，通过加或不加抗生素计算阳性细胞比例，确保对照板和抗生素板的影响一致。此外，实验方案中包括了小体积管的额外分装，用于模拟冻融带来的活性滴度下降，以获得具有参考价值的真实滴度。
文章旨在提供包装高滴度慢病毒以及活细胞计数的详细指南，读者可通过下方链接查阅相关文章，获取更深入的知识与技巧。
【拓展阅读】
1. 包装高滴度慢病毒的秘笈 知乎专栏
2. 细胞增殖与存活研究方法一览 知乎专栏
