分光光度法测定火腿肠中亚硝酸盐的含量
一,原理
样品经沉淀蛋白质,除脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化,再与盐酸萘乙二胺偶合形成红色染料,通过测定吸光度可与标准进行比较定量.
二,试剂
亚铁氰化钾溶液:称取10.6g K4Fe(CN)6 .3H2O溶于水定容100mL.
乙酸锌溶液:称取11g Zn(CHCOO)2 .2H2O加1.5mL冰乙酸,溶于水定容50mL.
饱和硼砂溶液:称取5g NaB4O7 . 10H2O溶于100mL热水中,冷却备用.
20%盐酸:取54mL浓盐酸加水45mL.
0.4%对氨基苯磺酸:称取0.4g对氨基苯磺酸溶于100mL20%盐酸中.
200ug/mL亚硝酸钠标准液:精密称取0.1000g经硅胶干燥24小时的亚硝酸钠(GR),加水溶解后,定容500mL.
5.0ug/mL亚硝酸钠标准使用液:吸取亚硝酸钠标准液5.0mL于500mL容量瓶中用重蒸馏水定容.
三,仪器
电炉 电热恒温水浴锅 玻棒 漏斗 铁架台
烧杯(200mL2个,500mL2个,50mL1个)
容量瓶(250ml1个) 吸管(2mL,5mL,10mL,50mL各1支)
比色管(50mL10支)
四,操作步骤
1,样品处理
称
取3g左右火腿肠于50mL烧杯中,加入饱和硼砂溶液6.3mL,以玻棒搅匀,用70℃左右的重蒸馏水约100mL将其洗入250mL的容量瓶中,置于沸
水浴中加热15分钟,取出,一边转动一边加入5mL亚铁氰化钾溶液,摇匀,再加入5mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质.定容,混匀,静置半小时,除去上层脂肪,
过滤,弃去初滤液30mL,收集滤液备用.
2,绘制标准曲线
吸取
0.00,0.20,0.40,0.60,0.80,1.00,1.20mL亚硝酸钠标准使用液,分别置入7支50mL比色管中,各加入0.4%对氨基苯
磺酸2mL,混匀,静置3-5分钟后各加入1.00mL
0.2%盐酸萘乙二胺溶液,加水至刻度,混匀,静置15分钟,用2cm比色皿,以零管调零,于538nm处测量吸光度,以亚硝酸钠含量为横坐标,吸光度为
纵坐标,绘制标准曲线.
3,样液测定
吸取40mL样品处理液于50mL比色管中,按标准曲线绘制步骤进行,测定吸光度,通过吸光度从标准曲线上查出亚硝酸钠的含量(ug).
五,计算
X × 1000
亚硝酸钠的含量(g/kg) = ——————————————
m × 40/250 × 1000 ×1000
X —— 40mL样品处理液中亚硝酸钠的含量(ug)
M —— 火腿肠的质量(g)
