蛋白质测定的方法有凯氏定氮法、双缩脲法、酚试剂法、紫外吸收法等。
一、凯氏定氮法。
1、凯氏定氮法是测定化合物或混合物中总氮量的一种方法。
2、即在有催化剂的条件下,用浓硫酸消化样品将有机氮都转变成无机铵盐。
3、然后在碱性条件下将铵盐转化为氨,随水蒸气蒸馏出来并为过量的硼酸液吸收,再以标准盐酸滴定,就可计算出样品中的氮量。
二、双缩脲法。
1、双缩脲法是一个用于鉴定蛋白质的分析方法。
2、双缩脲试剂是一个碱性的含铜试液,呈蓝色,由1%氢氧化钾、几滴1%硫酸铜和酒石酸钾钠配制。
三、酚试剂法。
1、取6支试管分别标号,前5支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,不加标准蛋白溶液。
2、在室温下放置30分钟,以未加蛋白质溶液的第一支试管作为空白对照,于650nm波长处测定各管中溶液的吸光度值。
四、紫外吸收法。
1、大多数蛋白质在280nm波长处有特征的最大吸收,这是由于蛋白质中有酪氨酸,色氨酸和苯丙氨酸存在,可用于测定0.1至0.5mg/mL含量的蛋白质溶液。
2、取9支试管分别标号,前8支试管分别加入不同浓度的标准蛋白溶液,1号试管不加标准蛋白溶液,最后一支试管加待测蛋白质溶液,而不加标准蛋白溶液。
3、每支试管液体总量通过加入蒸馏水补足而保持一致,将液体混合均匀,在280nm波长处进行比色,记录吸光度值。