氨基酸序列测定，即蛋白质序列测定，涉及确定蛋白质中氨基酸残基精确排列顺序的过程。此信息对于理解蛋白质结构与功能、识别新蛋白、研究蛋白质相互作用及疾病关联至关重要。以下是几种主要的氨基酸序列测定方法。
1. Edman 降解：
· 这是一种经典的蛋白质序列分析技术，通过逐步、有选择性地去除N端氨基酸并鉴定，过程可反复进行，逐一测定氨基酸序列。
· 尽管高效，但此方法受限于较短多肽链，因长链反应效率降低影响结果准确性。
2. 质谱法：
· 质谱法是一种强大的分析工具，用于确定氨基酸的质量或质量/电荷比（m/z），推断氨基酸序列。
· 在蛋白质质谱法中，蛋白质或肽经酶切割成小片段后引入质谱仪分析。
· 串联质谱（MS/MS）提供肽段详情，有助于精确确定氨基酸序列。
3. 蛋白质/核酸数据库比对：
· 若已知待测蛋白基因，可通过翻译核苷酸序列预测氨基酸序列。利用生物信息学工具和数据库，如NCBI的BLAST等。
· 已知蛋白序列与数据库序列比对，发现同源性与功能相关性。
每种方法各有优势与局限，实际应用中，研究人员需根据实验条件与需求选择合适策略。随着技术进步，新测序技术与仪器不断涌现，加速准确氨基酸序列的测定。
