在高效液相色谱测定中，定量分析有多种方法。峰面积法和峰高法适用于特定样品的测定，而归一化法和内标法则用于杂质总量的测定，必须采用峰面积法。
面积归一化法通过计算各杂质峰的面积以及总和，确定其占总峰面积的百分比，但不包括溶剂峰。色谱图记录时间应根据各品种所含杂质的保留时间来定，通常为主成分保留时间的倍数，除非另有规定。
主成分自身对照法适用于峰面积差异较大的情况。首先，依据规定浓度配制对照溶液，调整检测器灵敏度，确保主成分峰面积准确。然后，测定供试品，记录时间，通常为主成分保留时间的倍数，通过比较供试品和对照溶液的峰面积来确定杂质的限度。
内标法用于测定杂质总量。先配制不含内标物质的供试品溶液，记录色谱图I再加入内标物质，得到色谱图Ⅱ。记录时间需为内标峰保留时间的倍数，内标峰高度需超过满标度的30%。根据内标物质峰的校正面积和各杂质峰的校正总面积进行计算，确保杂质总量小于内标物质。
加校正因子法用于测定特定杂质或主成分含量，需精密称取对照品和内标物质，配制对照溶液并测量峰面积或峰高，计算校正因子。然后，用含有内标物质的供试品溶液重复测量，计算实际含量。
外标法则是基于精密称取对照品和供试品，测量峰面积或峰高，通过已知的对照品含量计算待测成分的含量。对于微量注射器进样不精确的情况，建议使用定量环进样。
扩展资料
高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱、“高速液相色谱、“高分离度液相色谱、“近代柱色谱等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。
