关于山楂中有机酸的含量测定如下:
利用高效液相色谱仪对山楂中几种水溶性有机酸进行了分析,结果稳定,可靠,可为山楂的质量控制提供参考。
1、 仪器与试剂
高效液相色谱仪,配紫外检测器、柱温箱、及自动进样器组成。
酒石酸、草酸、苹果酸、抗坏血酸、柠檬酸、琥珀酸等有机酸对照品均为分析纯
磷酸二氢钠及磷酸为分析纯
水为高纯水
流动相经0.45um 滤膜过滤。
2、 对照品及供试品溶液的制备
准确称取各有机酸对照品适量(草酸 12.5mg,酒石酸25mg,苹果酸50mg,抗坏血酸5mg,柠檬酸250mg,琥珀酸5mg),加50mL水溶解,采用逐级稀释法配成一系列浓度的混合标样
准确称取山楂样品粉末(过 0.45mm孔径筛)约1g,置小烧杯中加适量水,超声提取0.5h,过滤后定容于50mL容量瓶中,取适量过0.45um滤膜,制成供试品溶液。
3、 色谱条件
色谱柱:ODS2(4.6mmX250mm,5um)
流动相:磷酸二氢钠-磷酸缓冲液(pH=2. 6)
流速:0.8mL/min
检测波长:210nm
柱温:25℃
进样量:10uL。
4、实验条件优化
采用纯水提取法提取水溶性有机酸,提取效率高,方法简便,药典中规定方法是室温浸泡,所需时间比较长。
本实验采用超声提取法,分别考察了20、30、40min的提取率。实验结果表明,超声时间太短,有些物质未提取出来或提取不充分,提取时间太长,色谱图又没有明显差异,因此,根据色谱峰个数、峰面积及经济角度,提取时间以30min为佳。
对水溶性有机酸的分离,无需有机相仅有水相即可获得满意的分离效果,而且在这种条件下,对色谱柱也没有损害。但是,通常情况下,流动相中需要加入酸抑制剂调节pH值来抑制有机酸的解离。
流动相pH值较低时对硅胶柱的键合相不利,且对柱子损害较大,而流动相pH>3 时,峰基本无分离。因此,本实验选择流动相 pH值为2. 6。
在本实验的有机酸检测波长210nm下,甲酸和乙酸自身的紫外吸收会干扰有机酸的测定,而磷酸盐缓冲液在紫外区几乎无吸收,选择磷酸二氢钠和磷酸缓冲体系调节pH值流速较大时出峰时间差别较小且分离效果较差,本实验确定流速为0. 8mL/min。