谷物萌发时淀粉酶活性的测定如下：
一、实验目的
了解淀粉酶的特点;学习淀粉酶的测定方法。
二、实验原理
1、淀粉酶(amylase)主要包括a一淀粉酶和B一淀粉酶，几乎所有植物中都存在有淀粉酶，特别是萌爱后的禾谷类种子淀粉酶活性最强。
2、a一淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化;而B淀粉酶不耐热，在70C15min则被钝化。
3、淀粉的水解产物麦芽糖能使3，5一二硝基水杨酸还原，生成3一氨基一5一硝基水杨酸540nm测定OD淀粉酶活力的大小与产生的还原糖的量成正比。
4、用麦芽糖制作标准曲线，用比色法测定淀粉生成的还原糖的量，以单位重量样品在一定时间内生成的还原糖的量表示酶活力。
三、实验器材
1、材料:发的小麦种子(长约1cm)。
2、仪器:分光光度计、离心机、恒温水浴(37C，70，100C3分)、标准麦芽糖溶液(1mg/ml)、精确称取100mg麦芽糖、用蒸水溶解并定容至100ml。
3、5一二硝基水杨酸(DNS试剂):精确称取1g3，5一二硝基水杨酸，溶于20m112mo1/LNa0H溶液中，加入50m1蒸馏水，再加入30g酒石酸钠待溶解后用蒸馏水定容至100m1。
四、实验步骤
1、麦芽糖标准曲线的制作:取7支干净的具塞刻度试管，编号，按表(教材P152)加入试剂摇匀，置沸水浴中煮沸5min。取出后流水冷却，加蒸馏水定容至20m1。以1号管作为空白调零点，在540nm波长下比色测定。
2、酶液制备:取10g萌发3天的小麦种子(芽长约1-1.5cm)，置研钵中，加石英砂和2m1蒸馏水，研磨成匀浆。将匀浆倒入离心管，用6m1蒸馏水分次将残渣洗入离心管在室温下放置提取15~20min，每隔数min搅动1次，使其充分提取。在3000rpm下离心10min，将清液倒入50m1瓶中加蒸馏水至刻度，摇匀。
3、酶活力的测定:取6支具塞刻度试管编号，按表(教材P152)进行操作。摇匀，置沸水浴中5min,取出后冷却，加蒸馏水至20m1,摇匀，在540nm波长下比色。
4、结果计算：淀粉酶活力=CxVT/WxVsxt)(mg/g/min)C为从标准曲线上查得的麦芽糖含量(mg);VT为淀粉酶原液总体积(m1);Vs为反应所用淀粉酶原液体积(m1);w为样品重量(g)t为反应时间(min)。
