一、Km值的定义:
(一)当酶促反应速度等于最大反应速度一半时的底物浓度即为Km值。(二)Km值是酶促反应的特征性常数。
二、实验原理
(一)双倒数作图法(林一贝氏作图法)
以1/[S]为横坐标,以1/V为纵坐标求Km值。(二)Hanes 作图法
[S]/V为横坐标,以[S]为纵坐标求Km值。(三)过氧化氢酶Km值测定的原理
1、HOz在过氧化氢酶的作用下分解生成了HO和 O2;
2Hzo过氧化氢爵,2H O+O21
2、[S]=加入的HO的量;
3、V=固定时间内反应掉的HzO2的量=加入HzO2的量―剩余HzO2的量;4、剩余HOz的量可通过 KMnO4滴定测出:
2KMnO4+5H,O2+3HpSO4→2MnSO,+KgSO4+5O2+8HzO