蛋白质等电点测定实验目的如下:
1、了解蛋白质的两性解离性质。
2、学习测定蛋白质等电点的一种方法。
3、加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。
4、了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。
5、了解蛋白质变性与沉淀的关系。
实验原理:
1、蛋白质是两性电解质。
2、蛋白质分子的解离状态和解离程度受溶液的酸碱度影响。
3、当溶液的PH为一定值时,蛋白质极性基团解离的正负离子数相等,净电荷为0,此溶液的PH值为该蛋白质的等电点。
4、不同蛋白质具有各自特定的等电点,与该蛋白质的组成结构有关。
5、在等电点时,蛋白质的理化性质都有变化,可利用性质的变化测定各种蛋白质的等电点。
可逆的沉淀反应:
1、蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去引起沉淀的因素后,蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中,并保持其天然性质而不变性。
2、如:盐析作用、低温下用乙醇(丙酮)短时间作用于蛋白质。
3、提纯蛋白质时,常利用此类反应。
不可逆沉淀反应:
1、蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质常变性而沉淀,不再溶于原来溶剂中。
2、加热引起的蛋白质沉淀与凝固,蛋白质与重金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。