三磷酸腺苷二钠（ATP）测定方法多样，以下列举几种主要的测定手段及其具体步骤：
1. 高效液相色谱法：
色谱条件：使用十八烷基硅烷键合硅胶作为填充剂。流动相采用0.2mol/L磷酸盐缓冲液（包含磷酸氢二钠和磷酸二氢钾，调节pH至7.0）与甲醇按95:5的比例混合。柱温设置为35℃，检测波长为259nm。
系统适用性试验：确保系统稳定，结果准确可靠。
2. 薄层扫描法：
分离方法：通过醋酸纤维薄膜电泳技术分离一磷、二磷及三磷酸腺苷二钠（ATP）。
扫描条件：测定波长设为257nm，参比波长设为360nm。光斑尺寸为1.4×1.4mm，间距Sx为4，Δ设为0.2mm。采用反射法锯齿扫描。
3. 高效液相色谱法：
色谱柱：使用50mm×4mm不锈钢色谱柱，填充弱碱性离子交换球状硅胶，直径3μm。
流动相：0.25mol/L磷酸盐缓冲液（pH 7.0）。
检测条件：检测波长为259nm，柱温35℃。
4. 高效液相色谱法（针对三磷酸腺苷二钠注射液）：
仪器：LC-10ATVP高效液相仪。
色谱柱：岛津WAX-1柱，直径4.5cm，长度10cm。
流动相：磷酸氢二钠缓冲液，pH值为7.0，通过0.25mol/ L的磷酸二氢钾溶液调节。
检测波长：259nm。
每种方法均在各自领域内展现出了高效、精确的测定能力，为ATP含量的准确测定提供了有力的支持。
