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测定蛋白质浓度的波长是

有货之家 有货之家 发表于2024-11-14 00:43:13 浏览335 评论0

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关于测定蛋白质浓度的波长分享如下:

测定蛋白质浓度的波长是

测定蛋白质浓度是实验室中经常进行的一个分析操作,可以用于生物学、医学等领域。波长在此过程中起到了非常重要的作用,因为不同波长的吸光度与蛋白质的含量是有一定关系的。下面将从蛋白质吸收光谱和波长选择两个方面详细解答测定蛋白质浓度的波长问题。

一、蛋白质吸收光谱:

蛋白质在紫外线及可见光范围内均有吸收现象,通常最大吸收点位于280nm处,且吸收强度较高。这种吸收主要是由于蛋白质结构中存在芳香族氨基酸色氨酸(Trp)、酪氨酸(Tyr)和苯丙氨酸(Phe)等引起的。

其中色氨酸对紫外线的吸收最敏感,在278-282nm范围内吸收强度最高,而酪氨酸和苯丙氨酸对于紫外线的吸收较弱,一般在260-270nm处吸收。

由于280nm处的吸收峰强度较高,因此常用其来测定蛋白质的含量。但如果在光谱范围内存在干扰物质,则需要选择波长进行校正和测量。

二、波长选择:

1、280nm测定法:在实验室中,常用280nm光波来浓度蛋白质浓度。这是因为,这一波长靠近蛋白质吸收光谱最大吸收点,对于大部分蛋白质都存在准确的判断作用。如果样品中的异物或钯氰离子存在时间过长等原因导致功效下降,可以考虑试用其他波长。

2、布拉德福德(Bradford)法测酸洗木瓜蛋白质浓度:尽管280nm测定法取得很好的效果,但还是存在精确度较低和被不同物质影响诸多问题。

布拉德福德法不仅抗含量更加灵活,而且选择波长也有好处。首先将蛋白质样品通过酸洗法进行分解,并与Coomassie普通用染料结合,形成紫色复合物,可选择在595nm的波长进行测量。只要选波长正确,则可以测定出蛋白质的浓度。

3、其他方法:从理论和实践经验看,测定蛋白质浓度还有其他一些波长供科学家们选择,如230nm,240nm,或者各种二极管颜色。但是,科学家们通常不选择这些波长,因为它们的吸光度相比280nm的波长不够大或者有其他物质干扰问题。

总之,选择合适的波长测定蛋白质浓度是非常重要的。需要注意适当考虑样品中可能存在的物质,以及根据济普同于洋手段,准确选定实验波长