本方法仅适用于木瓜蛋白酶。 1、底物溶液：准确称取N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯盐酸盐1.42g，加10mmol/LEDTA、50mmol/L半胱氨酸液2.6mL，加适量水，用0.1mol/L氢氧化钠液调节pH至6.2，最后定容至50.0mL。
2、待测酶液：取试样用水稀释至适当浓度，并调节至pH6.2。 25℃恒温条件下，取25mL烧杯装在pH自动滴定仪上，加底物溶液3.75mL、3mol/L氯化钠溶液2.50mL、重蒸馏水1.25mL，混合后加入待测酶液后立即计时，用0.1mol/L氢氧化钠在电磁搅拌下连续滴定以保持pH6.2，记下每分钟所耗0.01mol/L氢氧化钠毫升数。同时进行空白校正。按下式计算木瓜蛋白酶的活力P（单位/mg）：
P =C·ΔV·1000/W
式中：c：氢氧化钠液的浓度，mol/LΔV：每分钟消耗氢氧化钠液的体积减去空白值W：反应液中木瓜蛋白酶的质量，mg。
