植物组织中游离氨基酸总量的测定

植物组织中游离氨基酸总量的测定如下：

测定植物体内游离氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

【原理】

游离氨基酸的氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，其颜色的深浅与游离氨基酸的含量成正比。

【仪器设备】

分光光度计电子天平容量瓶25ml或50ml 3个漏斗（直径6厘米）3个、滤纸适量20ml刻度试管 7支移液管0.5ml 3支、5ml 1支试管架玻棒吸耳球剪刀移液管架橡皮筋、塑料薄膜（封试管口）吸水纸擦镜纸适量电炉水浴锅（含铁丝筐）。

【试剂】

1. 3%茚三酮试剂

称3g茚三酮用95%乙醇溶解定容到100ml容量瓶里，贮于棕色瓶中。此试剂应放在冷凉处，不宜久放，使用期约10天。

2. 氰酸盐缓冲液（按以下方法配制）：

（1）NaCN贮备液0.01mol/L（490mg/L）。

（2）醋酸缓冲液：称360g醋酸钠（含三分子结晶水）溶于约300ml无氨蒸馏水中，加66.67ml冰醋酸再用无氨蒸馏水稀释至1L。

取溶液（1）20ml，用溶液（2）定容到1L。

3. 标准氨基酸   精确称取在80℃下烘干的亮氨酸13.1mg（或α-丙氨酸8.9mg）溶于10%的异丙醇中，并在100ml容量瓶中用10%异丙醇稀释至刻度，混匀，即为1mmol/L的标准氨基酸贮备液，置冰箱中保存。为了制备工作液，可取贮备液与等量无氨蒸馏水混合，此液浓度为0.5mmol/L，即1ml含氨基酸0.5μmol，或氨基氮7μg。

4. 95%乙醇5.异丙醇（分析纯）。