用邻菲罗啉测定铁的反应条件是：邻二氮菲（1，10—二氮杂菲），也称邻菲罗啉是测定微量铁的一个很好的显色剂。
在pH2—9范围内（一般控制在5—6间）Fe2+与试剂生成稳定的橙红色配合物Fe（Phen）32+lgK=21.3，在510nm下，其摩尔吸光系数为1.1104L/moL.cm,）Fe3+与邻二氮菲作用生成兰色配合物，稳定性较差，因此在实际应用中常加入还原剂盐酸羟胺使Fe2+还原为Fe3+：2Fe3++2NH2OHHCl=2Fe2++N2+4H++2H2O+2Cl-本方法的选择性很高。
邻菲啰啉分光光度法测定铁含量的原理，在pH=2~9的溶液中，邻二氮菲与2价亚铁离子（Fe2+）发生显色反应，该反应的选择性很高，而且生成的橙红色络合物非常稳定，lgK稳=21.3（20℃），其溶液在510nm（可见光）有最大吸收峰，利用此显色反应，可以用可见光分光光度法测定微量铁。
在弱酸性缓冲溶液条件下，2价铁与邻菲啰啉形成3配体的络合物，在510 nm下有选择吸收。其吸光度与铁的浓度呈正比。可以用标准曲线法定量，用该法测得的铁含量为试样中的亚铁的含量。因为只有2价铁与邻菲啰啉形成橘红色的络合物。而3价铁不发生这个显色反应，但能生成浅蓝的络合物应除去。
