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简述紫外吸收定糖定磷法测定核酸的特点

有货之家 有货之家 发表于2024-11-14 01:25:35 浏览296 评论0

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【答案】:(1)紫外吸收法

简述紫外吸收定糖定磷法测定核酸的特点

在一定pH下测定样品的紫外吸光度(A260),即可由下式计算样品中的核酸含量:

C=Mr×A260/ε×L

其中:C为核酸的含量(mg/mL),Mr为相对分子质量,A260为核酸溶液的吸光度,ε为摩尔消光系数(即1升溶液中含1摩尔核酸的光吸收值),L为比色杯的内径(cm)

(2)定糖法

RNA的测定:RNA分子中所含的核糖经浓硫酸或浓盐酸作用脱水生成糠醛,糠醛可与3,5-二羟甲苯(苔黑酚或地衣酚)反应生成绿色化合物,该化合物可在670~680nm波长下进行比色测定。

DNA的测定:DNA分子中的脱氧核糖在冰醋酸或浓硫酸存在下可与二苯胺反应生成兰色化合物,该化合物可在595~620nm波长下进行比色测定。

(3)定磷法

RNA和DNA中都含有磷酸,可以进行磷的测定。纯的核酸中含磷量在9.5%左右,因此,测出核酸中的磷含量就可计算核酸的含量。测定时先将核酸用强酸消化成无机磷酸,后者与定磷试剂中的钼酸反应生成磷钼酸,在经过还原作用而生成蓝色的复合物,最后在650~660nm进行比色测定。