等电聚焦电泳法是一种高分辨率的生物化学分析技术，用于测定蛋白质等电点。该技术基于蛋白质的两性电解质特性，即在不同pH环境中会带正或负电荷，从而在电场中移动。在一个具有连续pH梯度的环境中，蛋白质会聚焦在与其等电点相匹配的pH位置，通过测量聚焦位置的pH值，即可确定其等电点。
六十年代中期，等电聚焦技术迅速发展，如今已能分辨0.001pH单位的精细差异。其优点包括分辨力高、重复性好、样品处理量大以及操作简便。在生物化学、分子生物学和临床医学中，这项技术广泛应用，用于生物大分子的分离、鉴定以及等电点的测定。
两性电解质载体，如进口的Ampholine和国产的类似产品，是实现pH梯度的关键。它们在电场中形成连续的pH梯度，使蛋白质聚焦。理想的选择需具备缓冲性强、导电性好和分子量适中的特性。在电泳过程中，维持稳定的pH梯度至关重要，通常使用聚丙烯酰胺凝胶作为支持介质，以防止扩散。
等电聚焦电泳有多种形式，包括垂直管式和水平板式。后者具有加样量大、节省试剂且能避免电极液电渗作用的优点。测定pH梯度的方法包括直接测量、标准曲线法和使用微电极。
实验中，需要用到的仪器和试剂包括电泳仪、凝胶材料、各种溶液和精确的pH测量工具。操作步骤包括配制胶液、装管、电泳、胶条剥除和固定，以及测定和绘制pH梯度曲线。在固定后，通过测量聚焦位置的pH值，计算蛋白质的等电点。
在实验过程中，对试剂的纯度和新鲜度要求严格，以确保实验结果的准确性。同时，要注意防止烧胶和保护凝胶，如控制电压和电流，以及在处理过程中尽量减少对胶的损害。
总的来说，等电聚焦电泳法是一种精密且实用的生物技术，通过巧妙利用pH梯度，为我们提供了测定蛋白质等电点的强大工具。
