粪大肠菌群的测定1 定义 本规范采用下列定义 粪大肠菌群（Fecal coliforms）是一群需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌，在44.5℃±0.5℃培养24h～48h能发酵乳糖产酸并产气。 该菌直接来自粪便，是重要的卫生指示菌。3 仪器3.1 恒温水浴箱或隔水式恒温箱：44℃±0.5℃。3.2 温度计。3.3 显微镜。3.4 载玻片。3.5 接种环。3.6 电磁炉。3.7 三角瓶，250mL。3.8 试管：15×150mm。3.9 小倒管穗慎。3.10 pH计或pH试纸。3.11 高压灭菌器。3.12 灭菌吸管，10mL、1mL。3.13 灭菌平皿：直径90mm。4 培养基和试剂4.1 双倍乳糖胆盐（含中和剂）培养基 成分：蛋白胨 40g 猪胆盐 10g 乳糖 10g 0.4％溴甲酚紫水溶液 5mL 卵磷脂 2g 吐温80 14g 蒸馏水 1000mL 制法：将卵磷脂、吐温80溶解到少量蒸馏水中。将蛋白胨、胆盐及乳糖溶解到其余的蒸馏水中，加到一起混匀，调pH到7.4，加入0.4％溴甲酚紫水溶液，混匀，分装试管（每支试管中加一个小倒管）。68.95kPa（115℃ 10 lb）20min灭菌。4.2 伊红美兰（EMB）琼脂 成分：蛋白胨 10g 乳糖 10g 磷酸氢二钾 2g 琼脂 20g 2％伊红水溶液 20mL 0.5％美蓝水溶液 13mL 蒸馏水 1000mL 制法：先将琼脂加到900mL蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾蛋白胨，混匀，使之溶解。再以蒸馏水补足至1000mL。校正pH值为7.2～7.4，分装于三角瓶内，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高压灭菌备用。临用时加入乳糖早敬糖并加热融化琼脂。冷至60℃左右无菌操作加入灭菌的伊红美蓝溶液，摇匀。倾注平皿备用。4.3 蛋白胨水（作靛基质试验用） 成分：蛋白胨（或胰蛋白胨） 20g 氯化钠 5g 蒸馏水 1000mL 制法：将上述成分加热融化，调pH值为7.0～7.2，分装小试管，103.43kPa（121℃ 15 lb）15min高压
