pcr测定中的污染主要是指基因或核酸污染。
知识拓展:
一、污染在PCR中的影响及类型:
污染会导致PCR结果的错误解读,主要分为两种类型:外源性污染和内源性污染。外源性污染是指来自实验环境、试剂、仪器等的DNA或RNA污染,内源性污染是指实验样本中存在的未被完全灭活的DNA或RNA。
二、外源性污染的来源:
1、试剂污染:PCR试剂、引物和探针可能含有外源性DNA,如不进行严格控制可能导致结果失真。
2、实验环境:实验室空气中可能悬浮着DNA,若不进行空气净化,可能会引入污染。
3、操作污染:操作人员的DNA可能在操作过程中传播到样品中,特别是在样品制备、装载模板等步骤。
三、内源性污染的防范:
1、样本制备:样本制备时要避免交叉污染,使用专门的试剂和设备,分开操作,尽可能减少污染风险。
2、质控对照:设置负对照和阳性对照,用以检测污染情况,保证结果的准确性。
3、减少悬浮颗粒:在制备样本的过程中,避免产生气溶胶,减少悬浮颗粒带入。
4、反转录过程:对于RNA样本,需要在制备过程中进行反转录,确保RNA转为cDNA,降低RNA的降解。
四、污染控制的方法:
1、严格操作:实验操作过程中,采取单一方向、单独空间等严格操作措施,减少交叉污染。
2、消毒灭活:使用漂白剂、紫外线等方法对实验环境进行消毒,降低环境中DNA的污染。
3、负控实验:设立负对照样本,检测是否有污染,确保结果的准确性。
4、引物和探针设计:合理设计引物和探针,避免与其他序列发生交叉反应。
五、总结:
在PCR测定中,污染是影响结果准确性的重要因素之一。为保证结果的可靠性,科研人员应严格控制外源性和内源性污染,采取相应的污染控制措施,确保实验的准确性和可重复性。