羟基自由基(.OH),作为最具活性和攻击性的分子,其潜在危害不容忽视。它能与多种生物分子发生剧烈反应,导致氧化损伤,甚至影响细胞结构和功能,与衰老、疾病等多种生物过程息息相关。然而,由于其寿命短、反应活性高且浓度极低,精确测定羟基自由基含量一直是一项国际性的挑战。本文将概述近年来出现的几种羟基自由基测定方法:
电子自旋共振法(ESR):通过自旋捕捉技术,将自由基与捕捉剂结合形成稳定的化合物,然后通过ESR测定其存在。
高效液相色谱法(HPLC):包括二甲基亚砜和水杨酸捕集羟基自由基,生成可被分离和检测的产物,再进行定量分析。
化学发光法:利用发光剂被活性氧自由基氧化后发出的光子,间接测量自由基的浓度,具有灵敏度高、操作简便等优点。
氧化褪色光度法:通过观察溶液颜色变化来判断羟基自由基的含量。
极谱法和毛细管电泳-电化学检测法:利用电化学原理,提供另一种测定羟基自由基的途径。
胶束电动毛细管色谱法:结合电泳和色谱技术,提高检测的灵敏度和选择性。
这些方法各有优缺点,目前尚在不断发展和完善中,以期找到更准确、有效的羟基自由基测定手段。