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考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线

有货之家 有货之家 发表于2024-11-14 03:45:47 浏览773 评论0

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关于考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线如下:

考马斯亮蓝法测定蛋白质标准曲线

一、试剂:

1.考马斯亮蓝试剂:

考马斯亮蓝G一250100mg溶于50ml95%乙醇,加入100ml85%H;PO4,加蒸馏水稀释至 1000ml滤纸过滤。最终试剂中含0.01%(W/V)考马斯亮蓝G-250.4.7%(W/V)乙醇,8.5%(W/V)HPO4。

2.标准蛋白质溶液:

纯的牛血清血蛋白,预先经微量凯氏定氮法测定蛋白氮含量,根据其纯度同0.15mol/LNaCl配制成100ug/ml蛋白溶液。

二、器材:

722S型分光光度计使用及原理,移液管使用

三、标准曲线制作:

1.以A595nm为纵坐标,标准蛋白含量为横坐标(六个点为10ug、20ug、40ug、50ug、60ug),在坐标轴上绘制标准曲线。

2.利用标准曲线查出回归方程。

3.用公式计算回归方程。

4.或用origin作图,测出回归线性方程。即A595m-aXX()+6一般相关系数应过0.999以上,至少2个9以上。

5.绘图时近两使点在一条直线上,在直线上的点应该在直线两侧。

四、蛋白质含量的测定:

样品即所测蛋白质含量样品(含量应处理在所测范围内),依照操作步骤1操作,测出样品的A595nm’然后利用标准曲线或回归方程求出样品蛋白质含量。

一般被测样品的A595m值在0.1-0.05之间,所以上述样品如果A595m值太大,可以稀释后再测As95mm值,然后再计算。

五、注意事项:

1.玻璃仪器要洗涤干净。

2.取量要准确。

3.玻璃仪器要干燥,避免温度变化。

4.对照:用被测物质以外的物质作空白对照。