考马斯亮蓝法是一种广泛应用于蛋白质定量的精确技术，但对于小分子碱性多肽，如核糖核酸酶或溶菌酶，其适用性有限。在使用过程中，需注意去污剂浓度，如TritonX-100、SDS、NP-40等，浓度超过0.2%可能会影响测定结果。此方法特别适合于细胞骨架的检测。
首先，要配制Bradford浓染液：取100mg考马斯亮蓝G-250溶解在50mL的95%乙醇中，接着加入100mL浓磷酸，然后用蒸馏水补充至200mL。将此染液在4℃保存至少6个月以保持稳定。
对于标准曲线的制作，推荐使用性质接近待测样本的蛋白质，例如测定抗体时，纯化的抗体可用作标准。若待测样本未知，也可用抗体作为标准蛋白，标准曲线通常在20μg/100μL至150μg/100μL的范围内绘制。
在实验步骤中，将待测样本溶解在100至1体积缓冲溶液中，这个缓冲溶液应与制作标准曲线时的缓冲溶液一致，比如PBS。然后，将浓染料结合溶液稀释1:5，如有沉淀产生，需过滤去除。将5mL稀释的染料加入样本，作用时间控制在5至30分钟内。染料与蛋白质结合后，溶液会由红色变为蓝色，此时在595nm波长下测量其吸光度，但反应时间需控制在30分钟内。
最后，根据绘制的标准曲线，计算出待测样本的蛋白质浓度。
