答:测定方法如下:
(1)方法原理
在碱性条件下用氢氧化铜沉淀蛋白质,然后按照开氏法测定氮。此法的优点是沉淀较快,缺点是有些氨基酸可与铜生成沉淀,使测定结果偏高。
(2)仪器设备
定氮仪、电炉、分析天平等。
(3)试剂配制
①10%硫酸铜溶液:称取50克硫酸铜(CuSO4·5H2O)溶于水,定容至500毫升。
②2.5%氢氧化钠(NaOH)溶液:称取2.5克氢氧化钠溶于100毫升水中。
③0.02摩尔/升硫酸溶液:先配制0.10摩尔/升 H2SO4溶液,标定后稀释5倍。
④2%硼酸溶液、混合指示剂、40%氢氧化钠(NaOH)溶液:同开氏法全氮测定。
⑤铁氰化钾溶液:1克铁氰化钾溶于100毫升水中。
(4)测定方法
①称取磨碎的叶子或枝条样品1.0000克左右放入250毫升烧杯中,加热水50毫升,加热至沸腾。趁热加入10%硫酸铜和5%氢氧化钠溶液各20毫升,充分搅拌,放置1小时,抽气过虑,沉淀用热水洗涤数次,最后用热水洗至无铜离子(用铁氰化钾溶液试滤液),使沉淀干燥。
②将沉淀连同滤纸一并移入开氏瓶中,测定全氮含量。每批样品测定的同时,用0.1克蔗糖(分析纯)代替试样做空白试验。
(5)结果计算
蛋白态氮的计算同全氮量的测定。