本文旨在介绍果蔬组织中超氧阴离子产生速率的测定方法。实验目的为学习该原理和操作技术。测定原理基于超氧阴离子（O2-）能与羟胺反应，生成NO2-。NO2-与对氨基苯磺酸和α-萘胺反应生成粉红色偶氮染料，该染料在530 nm波长下具有显著光吸收。通过羟胺氧化方法测定果蔬组织中超氧阴离子产生速率。
O2-与羟胺的反应式如下：
NH2OH + 2O2+ H+ → NO2+ H2O2 + H2O
利用此反应，可通过制作标准曲线计算样品中O2-产生速率。标准曲线制作需使用KNO2，计算公式为：[NO2-]浓度×2=[O2-]浓度。
实验材料包括苹果、梨、番茄、桃等，所需仪器及用具包括研钵、高速冷冻离心机、移液器等。试剂则包括100 mmol/L pH 7.8磷酸缓冲液、50 mmol/L pH 7.8磷酸缓冲液、提取缓冲液（含1 mmol/L EDTA，0.3% Triton X-100和2% PVP）、1 mmol/L盐酸羟胺溶液、17 mmol/L对氨基苯磺酸溶液、7 mmol/L α-萘胺等。
实验步骤分为四个部分。首先，制作标准曲线，取7支试管，分别加入各种试剂并保温1小时，然后进行显色反应并测定吸光度值，绘制标准曲线。其次，提取果蔬样品，加入提取缓冲液研磨匀浆后，进行离心，收集上清液。接着，测定上清液中O2-的产生速率，取样后加入盐酸羟胺溶液，保温反应，进行显色反应并测定吸光度值。最后，计算O2-产生速率，根据样品管与对照管吸光度值的差值，从标准曲线上查得相应的O2-量，表示为nmol·min-1·g-1 FW。
实验中需注意，在显色反应后可选择加入正丁醇进行萃取，或在样品与羟胺反应后，加入乙醚萃取叶绿素。实验结果表明，通过此方法可以准确测定果蔬组织中超氧阴离子的产生速率，对了解果蔬抗氧化特性具有重要意义。
