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胰蛋白酶试剂盒怎么测定胰蛋白酶活性

有货之家 有货之家 发表于2024-11-14 04:42:25 浏览801 评论0

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1、N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)测定法:

胰蛋白酶试剂盒怎么测定胰蛋白酶活性

取2个光程为1cm的带盖石英比色杯,分别加入25℃预热过的2.8mL 1.0mmol/L BAEE底物溶液。向一个比色杯内加入0.2mL10mmol/L HCl,作为空白,在波长253nm下调节仪器零点向另一个比色杯中加入0.2mL待测酶液,立即盖上盖迅速混匀计时,每半分钟读数一次,共读3~4min。测得的结果要使△A253nm/min控制在0.05~0.100之间为宜。若偏离此范围则要适当增减酶量。

以时间(t)为横坐标,光吸收值( A253nm)为纵坐标作图,在直线部分任选一个时间间隔与相应的光吸收值变化(△A253nm),按以下公式计算胰蛋白酶的活力单位。

(1)酪氨酸对照液的测定

以0.2mol/L盐酸溶液作参比,在波长275nm处测定酪氨酸对照溶液的光吸收值(AS)。

[结果计算]

式中 A —— 试管1测得的光吸收值

A0 —— 试管2测得的光吸收值

AS ——酪氨酸对照溶液的光吸收值

C对照 ——酪氨酸的浓度(μg/ mL)

M对照 ——酪氨酸的分子量(181.19)

V总 ——反应总体积(mL)

V样品 ——加入的样液体积(mL)

t ——反应时间(min)

n——样品的稀释倍数。