1、N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)测定法:
取2个光程为1cm的带盖石英比色杯,分别加入25℃预热过的2.8mL 1.0mmol/L BAEE底物溶液。向一个比色杯内加入0.2mL10mmol/L HCl,作为空白,在波长253nm下调节仪器零点向另一个比色杯中加入0.2mL待测酶液,立即盖上盖迅速混匀计时,每半分钟读数一次,共读3~4min。测得的结果要使△A253nm/min控制在0.05~0.100之间为宜。若偏离此范围则要适当增减酶量。
以时间(t)为横坐标,光吸收值( A253nm)为纵坐标作图,在直线部分任选一个时间间隔与相应的光吸收值变化(△A253nm),按以下公式计算胰蛋白酶的活力单位。
(1)酪氨酸对照液的测定
以0.2mol/L盐酸溶液作参比,在波长275nm处测定酪氨酸对照溶液的光吸收值(AS)。
[结果计算]
式中 A —— 试管1测得的光吸收值
A0 —— 试管2测得的光吸收值
AS ——酪氨酸对照溶液的光吸收值
C对照 ——酪氨酸的浓度(μg/ mL)
M对照 ——酪氨酸的分子量(181.19)
V总 ——反应总体积(mL)
V样品 ——加入的样液体积(mL)
t ——反应时间(min)
n——样品的稀释倍数。