测定氨基氮含量的步骤如下:
1.1 原理:样品中的铵离子或氨基与中性甲醛反应,形成酸或羧酸,随后用氢氧化钠溶液进行滴定。
1.2 试剂准备:需要18%的中性甲醛溶液,0.1%的甲基红指示剂,0.5%的酚酞指示剂,0.1mol/l的盐酸,以及0.03569mol/L的氢氧化钠标准溶液。
1.3 实验器材:所需设备包括250ml锥形瓶,5ml吸量管,25ml碱式滴定管,定量加液器,50ml量筒,漏斗和试管。
1.4 操作步骤:首先过滤发酵液,精确取2.50ml滤液至250ml锥形瓶,加入20ml蒸馏水,摇匀。然后加入2-3滴甲基红指示剂,用0.1mol/l盐酸调整至红色,静置3分钟。接着,用0.03569mol/L氢氧化钠标准溶液滴定至黄色,此时为终点。记录下消耗的标准氢氧化钠溶液体积。
1.5 计算:氨基氮含量(以氮计,单位:mg/100ml)可以通过以下公式计算:
M × V1 × m × 100 / 0.03569 × V1 × 14 × 100 = 20 × V1 / V2
其中,M是氢氧化钠滴定溶液的浓度(mol/L),V1是滴定时消耗氢氧化钠的体积(ml),V2是样品体积(ml),m是氮原子的摩尔质量(14mg/mmol)。
1.6 注意事项:使用标准氢氧化钠溶液时,其有效期不得超过两个月。