吲哚(indol)试验:有些细菌如大肠埃希菌、变形杆菌、霍乱弧菌等能分解培养基中的色氨酸生成吲哚(靛基质),经与试剂中的对二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚而呈红色,是为吲哚试验阳性。
原理:细菌分解蛋白胨中的色氨酸,生成吲哚(靛基质),经与试剂中的对位二甲基氨基苯甲醛作用,生成玫瑰吲哚。
培养基:邓亨氏蛋白胨溶液
试剂:常用下述两种。
1.欧立希氏(Ebrlich′s)吲哚试剂
对位二甲基氨基苯甲醛(P-dimethyl aminobenzaldehyde) 1g
纯乙醇 95ml
浓盐酸 20ml
先以乙醇溶解试剂,后加盐酸,要避光保存。
2.Kovacs试剂
对位二甲基氨基苯甲醛 5g
戊醇(聚异戊醇) 75g
浓盐酸 25ml
方法:以接种环接种待试细菌的新鲜斜面培养物于邓亨氏蛋白胨溶液中, 37℃培养24~48小时后(可延长4~5天)。于培养液中加入戊醇或二甲苯2~3ml,摇匀,静置片刻后,沿试管壁加入试剂2毫升。在戊醇或二甲苯下面的液体变红色者为阳性反应。
也可将一指头大的脱脂棉,滴上两滴欧立希氏试剂,再在同处加滴两滴高硫酸钾(K2S2O4)饱和水溶液,置于含培养液的被检试管中,离液面约半寸,置烧杯内水浴煮沸为止,脱脂棉上出现红色为阳性。此法略繁,但省试剂且准确,因为将试剂加到液体中,吲哚和粪臭素均呈阳性,而用此法,只是吲哚(它能挥发)呈阳性反应。
亦可以滤纸片浸湿1%的二甲基苯丙烯甲醛的10%浓HCl溶液,然后以接种环刮取一环琼脂的纯培养物涂布于该滤纸上。
细菌涂印周围呈蓝色者为阳性,细菌涂印周围无色泽变化或淡黄色者为阴性。
厌氧菌用蛋白胨水
蛋白胨 20g
葡萄糖 10g
硫乙醇酸钠 1g
Na2HPO4(无水) 2g
琼脂 1g
蒸馏水 1000ml
加热溶解,调整pH至7.4~7.6,过滤,分装小试管,15磅高压15分钟。